基于颜色反应的糖基转移酶的筛选方法构建文献综述

开题报告内容： 一、研究背景糖基转移酶是自然界中普遍存在的一种酶，它的主要功能是以生物分子为底物催化糖苷键的形成。

但是由于底物类型广泛，缺乏可以通过糖基转移区分的特征，因此，长期以来检测糖基转移酶活性的方法主要是基于质谱法、色谱分离法、放射化学标记法、免疫学方法或pH指示剂法的低通量方法[1]。

这些方法的问题包括：样本处理时间长、成本高，需要处理放射性标记材料，对化验信号多重操作及配备高灵敏度或高度专业化的设备，这些常常使它们过于昂贵或不适合高通量格式。

导致在工业领域中，糖基转移酶尚未发挥重要作用，因此激发了这项研究计划：提供一种简单、灵敏和定量的方法来自动高通量筛选糖基转移酶，并希望得到广泛的应用[2]。

二、拟解决问题由于糖基转移酶具有高度的立体选择性，因此糖基转移酶是高精度合成复杂寡糖结构和糖基化天然产物的首选生物催化剂。

但是糖基转移酶糖基化的共同问题是，UDP-G通常价格昂贵，无法用作合成试剂，因此糖基化生产规模化和经济化的主要瓶颈是高效的UDP-G再生[3]。

反应一是天然产物Leloir糖基转移酶(GTs) 以昂贵的UDP-G作为底物进行糖基化，反应二是蔗糖合成酶(SuSy)催化蔗糖残基与尿嘧啶二磷酸盐(UDP)生成UDP-G和果糖。

串联转化过程中SuSy和GT反应的耦合产生UDP循环，使UDP-G不断再生，成为合成诺西太加糖产物的有效供体。

通过偶联糖基转移酶进行诺西太加糖产物合成，利用SuSy从蔗糖中再生UDP-G和果糖，可以探索什么可能是原型GT反应的临界限制，并能通过DNS法进行比色分析检测果糖的含量以测定Leloir糖基转移酶(GTs)的活性[4]。