5-氯噻吩-2-甲酸中5-氯噻吩-2-甲醛检测方法的开发与验证文献综述

开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）

1. 研究问题：

5-氯噻吩-2-甲酸是药物利伐沙班合成的重要起始物料，而5-氯噻吩-2甲醛是合成5-氯噻吩-2-甲酸过程中的杂质，因5-氯噻吩-2甲醛具有基因毒性，根据ICH M7相关指导原则将其限度控制为50ppm，采用液相色谱法进行检测，并根据中国药典2015年版中的指导原则进行方法开发和验证。

1. 研究手段：液相色谱法
2. 论文综述：

利伐沙班为抗血栓形成药，用于择期髋关节或膝关节置换手术成年患者，以预防静脉血栓形成（VTE），而5-氯噻吩-2-甲酸是其合成的重要起始物料，因5-氯噻吩-2甲醛是合成5-氯噻吩-2-甲酸过程中的杂质，为透明淡黄色液体，具有化学危险性，禁止接触皮肤，避免吞咽或吸入，属于基因毒性杂质，检测时需遵从ICH M7相关指导原则。

杂质按其毒性，可分为：毒性杂质和信号杂质，毒性杂质如重金属、砷盐；信号杂质如氯化物、硫酸盐等，一般盐无毒，但其含量的多少可反映药物纯度和生产工艺或生产过程问题^[1] 。 基因毒性杂质（genotoxic impurity，GTI）的定义是指能直接或间接损害 DNA，导致基因突变或具有致癌倾向的物质^[2]。2014年，ICH在EMA、FDA 等关于基因毒性杂质控制指导原则的基础上，发布了《M7基因毒性杂质指南》^[3]等技术指导文件，提供了遗传毒性杂质鉴别、分类、定量分析和控制的基本思路和策略。根据诱变性和致癌性，可将杂质分为五类，采用不同的控制措施。其中潜在遗传毒性杂质（potential genotoxic impurity，PGI）被定义为从结构上看类似基因毒性杂质，有警示性结构，但未经实验证明的化合物。

基因毒性杂质的结构多种多样，对于绝大数数的杂质而言，往往没有充分的毒性或致癌研究数据。因此对基因毒性杂质的产生以及可能的结构做准确的判断，需要从原料和反应物、最终产物的构造与副反应产物结构、催化剂、反应溶剂以及产物降解等多方面综合考虑^[4] ，5-氯噻吩-2甲醛又名2-羟基-3,4-二氟苯胺2-羟基-3,4-二氟苯胺，具有警示结构“苯胺”。此类化合物的分子结构中芳香烃的苯环与胺基的氮原子相连接，分子比较活跃，经代谢活化生成稳定的氮正离子（ArN H）。此离子能与 DNA 结合^[5]，具有致癌性和致突变性，是潜在基因毒性杂质。

杂质检查分析方法的建立可按本药典的要求作方法验证。在研究时，应采用几种不同的分离分析方法或不同测试条件以便比对结果，选择较佳的方法作为质量标准的检查方法。对于特殊试验材料，应在质量标准中写明。在杂质分析的研究阶段，可用可能存在的杂质、强制降解产物，分别或加入主成分中，配制供试溶液进行色谱分析，调整色谱条件，建立适用性要求，保证方法专属性和灵敏性。在采用现代色谱技术对杂质进行分离分析的情况下，对特定杂质中的已知杂质和毒性杂质，应使用杂质对照品进行定位；如无法获得该对照品时，可用相对保留值进行定位；特定杂质中的未知杂质可用相对保留值进行定位^[6]。5-氯噻吩-2甲醛的检测根据类似原理进行方法学的开发。

有关5-氯噻吩-2甲醛检测方法学的验证，验证指标有：准确度、精密度（包括重复性、中间精密度和重现性）、专属性、检测限、定量限、线性、范围和耐用性。在分析方法验证中，须采用标准物质进行试验。由于分析方法具有各自的特点，并随分析对象而变化，因此需要视具体方法拟订验证的指标^[7]。

对于药品制剂而言，起始物料中有关杂质的限度不仅带来本身的安全性问题，同时也与制剂的质量、稳定性密切相关，故在利伐沙班制备过程中严格控制5-氯噻吩-2甲醛的含量，杂质的含量控制对药品质量安全有众大意义。四、参考文献：

1. 《中国药典》2015版第四部，中国医药科技出版社，204
2. REDDY AVB，JAAFAR J，UMAR K，et al．Identification，control strategies，and analytical approaches for the determination of potential genotoxic impurities in pharmaceuticals：a comprehensive review[J] . J Sep Sci，2015，38(5): 764
3. ICH M7(R1).Assessment and Control of DNA Reactive (Mutagenic) Impurities in Pharmaceuticals to Limit Potential Carcinogenic Risk [EB/OL]. [2017-11-11]. http:// www.ich.org/fileadmin/Public_Web_Site/ICH_Products/Guidelines/Multidisciplinary/M7/M7_R1_Adde ndum_Step_4_2017_0331.pdf
4. 张 霁，张英俊，聂 飚.药物研发中基因毒性杂质的控制策略与方法探索进展[J].中国医药工业杂志，2018, 49(9): 1203-1220.
5. 谢含仪, 林云良, 张瑞凌, et al. 基因毒性杂质分析方法和前处理技术的研究进展[J]. 药物分析杂志, 2018, 38(10):16-24.
6. 《中国药典》2015版第四部，中国医药科技出版社，377
7. 《中国药典》2015版第三部，中国医药科技出版社，609-611